摘要：针对目前市场上出现的原料奶中掺尿素的现状，研究了两种方法可以快速检测掺假乳中的尿素，实验室方法和试纸法可检测出乳中尿素。 关键词：尿素 试纸 掺水常使牛乳比重低于正常值，目前一些不法分子常常采用既掺水又掺化肥（尿素）的双掺假办法来欺骗消毒者，以提高比重。取10ml待检牛乳于试管中，加6～8滴二乙酰肪溶液（1200mg二乙酰肪及60mg硫氨脲，加蒸馏水200ml溶解制成），混匀，再加入2～4m磷酸混匀，置水浴中煮沸，观察颜色变化。若呈现红色则说明乳中掺有尿素或被牛尿污染了。乳中加入尿素能提高非蛋白氮的含量，造成蛋白质增多的假象，并可提高比重。在原奶中加入6%的水，同时加入1%的尿素，可使牛奶密度不变。但是掺尿素不仅影响成品奶的口感和风味，改变牛奶的溶解度，还会损害消费者的身体健康，甚至造成中毒。
经典的凯氏定氮法，检测的是总氮的含量，无法检测尿素。其它的方法也有自身的不足。近来，国外有学者研究了一种方法可以迅速检测掺假乳中的尿素，利用简单的试纸即可检测出乳中尿素的含量，对于乳中掺尿素的定性和半定量检测非常有用。试纸上的尿素在脲酶的催化下释放出氨和二氧化碳，氨在苯酚的指示下起颜色变化。几秒即可观察结果。近几年，国内也开始有人用酶法来检测原料奶中的尿素掺假。遗憾的是他们都没有深入的研究试纸的其它性质，如最低检测限、保藏性、酶固定化等。基于前人的研究，我们根据自己的理解，优化制作工艺，并系统详细的研究了脲酶试纸的其它一些性质。本文主要介绍的方法大体有两种：
1、实验室方法
1.1 实验目的
掺尿素是为了提高蛋白质的含量。
1.2 原理
尿素与二乙酰一肟在酸性条件下，以锰离子（或三价铁离子）的催化产生缩合，并在氨基硫脲存在下，形成5.6一二甲基-1.2.4三嗉的红色复合物。
1.3 试剂配制
（1）酸性试剂：在1000ml容量瓶中加入约100ml蒸镏水，然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml，冷却至室温后，加入硫氨脲80mg、硫酸锰2g，溶解后用蒸馏水稀释至1000ml。置棕色瓶中放入冰箱内可保存半年。（2）2%二乙酰-肟试剂，称取二乙酰一肟2g，溶于100ml蒸馏水中。置棕色瓶中放入置冰箱内可保存半年。（3）使用液：取酸性试剂90ml和2%二乙酰-肟10ml，混合均匀，即可使用。
1.4 操作方法
取使用液1-2ml于试管中，加原奶一滴，加热煮沸约1min观察结果。
1.5 结果判定
正常原奶无色或微红色，掺入尿素或尿的原奶立即呈深红色。
2、试纸法
2.1 材料
（1）尿素酶：12mg/瓶，酶比活力>5IU/mg；（2）双圈牌定性滤纸（d=12.5cm）；（3）苯酚红：变色范围是pH6.5～8.0（棕黄>紫红）；（4）蒸馏水；（5）分析纯酒精。
2.2 工艺选择
2.2.1 工艺流程
工艺1：滤纸在试剂①中浸湿→镊子取出自然阴干（晾在玻璃棒搭空的架子上自然阴干）→滤纸在试剂②中浸湿，取出自然风干（方法同上）→置于保鲜袋冷藏
工艺2：试剂①试剂②等比例混合→离心5min取出上清液→浸入滤纸→取出自然阴干（方法同上）→置于保鲜袋冷藏
试剂①：脲酶与pH=6.8的缓冲液的混合液；试剂②：苯酚红与20%酒精溶液的混合液。
2.2.2 结果分析
如所用脲酶是从巨豆中提取的，则需离心取上清液，本实验所用的脲酶是从厂家直接购买的，为高纯度的脲酶产品，可溶，无须离心。从效果上看：工艺2制成的试纸颜色较工艺1的颜色深，显色效果不太好，故选择工艺1作为标准制作试纸。
2.2.3 试纸的抗干扰性实验
试纸制作后，我们通过大量实验，综合考虑试纸成本和显色效果，确定试剂的最佳比例为0.06%的酚红浓度和10U/ml的脲酶活力。以此最佳比例能检测到的尿素的最低含量是0.03%。脲酶分子复杂而脆弱，易受环境影响。已知重金属对脲酶活性有抑制作用。有关资料表明：正常原奶中含有一定量的金属。具体含量如下：每100g原料奶中含有金属的毫克数分别为：钾107、钠28.8、钙77、镁6、铁0.7、锌0.62、铜0.02。
2.3 实验目的
判断牛奶中一定量的金属是否会对试纸的使用造成影响。
2.4 实验步骤
选择含钙、镁、铁、锌、铜这五种金属元素的化合物。根据正常奶中的金属含量计算出各种金属盐的正常含量。确定金属盐的各个梯度的百分比指标，以此标准称量金属盐。
分别用尿素标准液和重蒸水作为溶剂来配制盐溶液。
2.5 结果分析
从显色结果分析得出：正常含量的各种金属盐不影响脲酶试纸的使用，显色正常。随着浓度的增加，各金属盐对显色的影响也越来越明显。其中钙盐、锌盐和铜盐到了一定的浓度，就影响试纸显色。但是由于我们选取的浓度梯度不够多，且没有仪器测定试纸上颜色的变化，只能靠肉眼比较判断。因此到目前为止还不能精确的判定各种金属影响该试纸使用的域值，只能定性的判断某种金属到了一定浓度范围会对试纸的显色造成影响。
3、结语
在原料奶中掺尿素是目前存在的大问题，通过简单快速的方法鉴定牛奶中是否掺尿素，以及研究这种方法的其它一些性质是十分必要的。本实验的目的就是制作这样一种试纸，并研究其抗金属干扰性，所获结果基本满意。但是由于实验条件的限制，我们在研究试纸的保藏性、酶固定化方面遇到了一定的困难，有待进一步深入研究，使其更利于商业化生产。
参考文献
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[2]成春喜.牛乳检测技术，农业科技与信息，2009.5.
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