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    栽培种花生EST—SSR引物的开发及应用

    来源:六七范文网 时间:2023-06-16 05:40:02 点击:

    摘 要:由于对农作物的要求不断提高,栽培种花生在产量和应用开发上实现了有效的实施。河南省内乡县农业技术推广中心在本文中利用相关材料,通过对EST-SSR引物和应用效果进行分析,从而实现了最佳的引物效果,实现了野生种子的有效性和扩展效果。

    关键词:花生;EST-SSR;开发及应用

    中图分类号:S565.2 文献标识码:A DOI:10.11974/nyyjs.20160333102

    花生作为一种豆类食品,在栽培过程中,它属于野生种子。这种野生性的花生能抵抗一些病虫害,还能形成高质量的油类。所以,为了保证花生在栽培期间形成良好的资源基础,就要利用SSR引物来实现完善性的开发和利用。

    1 EST-SSR的概述

    EST-SSR是一种新型的分子标记方式,在种植的多种作物上都能建立良好的标记效果,也能对物种进行有效的遗传分析。由于EST数据的不断增长,SSR成为主要的引物来源,所以EST-SSR引物开发成为花生作物主要的研究途径。从EST中体现的EST-SSR引物改变了传统的SSR引物开发形式,对一些基因建构和DNA复杂文库进行了优化,而且在表达基因上也得到间接和直接的联系,在遗传学领域发展中得到有效的利用。EST-SSR具有3种特殊优势:实现的信息量比较大,如果EST在某一处的标志发生连锁效应,EST就会与控制形状的相关基因有联系;通用性也比较好,由于EST是转录区的来源方式,具有较高的保守型,所以在亲缘物种之间具有明显的利用价值;不仅开发的成本比较低,开发形式也比较简单。在花生标记和研发上具有重要作用,不仅对分子标记实现了开发性和稳定性,对花生种子的栽培也具有重要意义[1]。

    2 研究材料与方法

    选择花生抗青枯病高油品系列,根据每个叶子和根的EST数量,对栽培品种的EST-SSR进行检测。要提取花生基因组的DNA,利用CTAB-酚方法,还要保证一定的测试浓度和纯度、DNA的质量等。实现EST的序列拼接方式,利用聚类的相关软件,将所有的EST拼接起来,并保证一定的拼接标准。再使用SSR位点进行搜索,在拼接后产生的序列方式上,利用一定的时间,搜索出相关的应用材料。还要对SSR引物进行设计,根据两端的保守区域,利用Primer3软件对引物进行设计,在引物温度的选择上、长度范围都要经过严谨筛选。实现PCR的扩增,根据PCR中每个反应体系,对SSR的正反向建立DNA模板,利用电泳方式在显微镜下进行分析。

    3 对结果进行分析

    根据实验的研究表明,栽培花生种子在DNA下的提取可以看出,所有的品种叶子都得到了较高的DNA质量,而且在紫外分光上的检测以及电泳上的检测,所有得到的DNA都比较完整,没有发生讲解现象[2]。在序列拼接期间,为了减少EST序列的冗余,就要对某个特定的基因实现共有序列方式。在EST-SSR中产生的分布频率和特点也不同,花生栽培中的种类比较丰富,在各个材料中,核苷酸出现的频率比较高,二核苷酸出现的重复类型比较多。在已经搜索出的栽培花生种子EST-SSR中,出现的频率也不同。在EST-SSR引物中产生的设计和检测的多态性中,利用Primer3可以看出,由于SSR位点出现的序列比较短、结构比较复杂,不能进行引物的设计。所以利用EST-SSR引物对花生的栽培品种进行PCR扩增,然后根据清晰的条带检测出种子的多样性,从而检测出引物的等位基因。

    4 对结论进行讨论

    根据实验和结果的分析可以得到,花生SSR引物在开发期间,主要对基因组SSR引物的开发、引物的开发转移等。利用EST-SSR方法,在花生种子栽培中检测出EST的位点,然后对作物中EST产生的SSR进行表示[3]。在EST-SSR中,大多数的植物都是以三核苷酸和二核苷酸作为主要的重复类型的,由于植物叶子的不同性,花生中的栽培品种以EST-SSR中的三核苷酸作为主要的重复类型。由于叶子中含有丰富的重复类型,所以在四、五、六核苷酸重复类型中不会经常出现。该实验也使用了扩增性,由于扩充区的复杂结构,引物在进行扩增期间,就会出现一些条带的显示,从而为栽培花生中的基因作为重要的引物序为。

    5 结 论

    在花生栽培过程中,利用EST-SSR引物进行开发和标记是可行的,不仅实现了野生种子的有效性和扩展效果,对花生中产生的多样性资源也产生重要意义。EST-SSR这种表达基因方式不仅能够对花生的分子类型进行标记,还能在遗传性方面实现多种方式的应用价值。

    参考文献

    [1] 江建华,倪皖莉,肖美华.花生SSR标记的开发及其应用现状和前景[J].花生学报,2012(2):39-45.

    [2] 唐梅,陈玉宁,任小平等.源于栽培种花生的EST-SSR引物对野生花生扩增的多态性[J].作物学报,2012(7):1221-1231.

    [3] 肖洋,廖伯寿,晏立英等.栽培种花生EST-SSR引物的开发及应用[J].湖北农业科学,2010(11):2625-2628.

    推荐访问:引物 种花 栽培 开发 EST