摘要：从感病雪莲果叶片的病斑上分离得到一种病原菌，根据病害症状特点、病原菌培养性状、病原菌形态特征等方面进行鉴定，确定该病原菌为镰刀菌属（Fusarium sp）真菌；药剂室内毒力试验结果表明，5种杀菌剂对镰刀叶斑病病原菌的毒力由高到低依次为20%烯肟·戊唑醇悬浮剂、37%苯醚甲环唑水分散粒剂、0%苯醚菌酯悬浮剂、25%丙环唑乳油和400 g/L氟硅唑乳油，以20%烯肟·戊唑醇悬浮剂的抑菌效果最好，其EC50为099 2 mg/L。
关键词：雪莲果；叶斑病；病原菌；杀菌剂；毒力
中图分类号： S43244文献标志码： A[HK]
文章编号：002-302（204）2-079-02[HS）][HT9SS]
收稿日期：204-03-07
基金项目：四川省教育厅青年基金项目（编号：09ZB078）
作者简介：涂勇（978—），男，四川南充人，硕士，副教授，从事植物病虫害防治方面的研究。Tel：（0834）2580028；E-mail：tuy-09@63com。
[ZK）]
雪莲果（Smallanthus sonchifolius）别称菊薯、雅贡、亚贡，原产于南美洲安第斯山。雪莲果富含人体所需的20多种氨基酸和钾、镁、锌、硒等多种微量元素及丰富的矿物质，它可调理血液，降低血糖、血脂和胆固醇，预防和治疗高血压和糖尿病，对老年人心脑血管也有明显的保健作用[2-3]。近年来雪莲果通过各种途径引入我国，目前已经在云南、福建、贵州、湖南、湖北等多个省份引种栽培成功[4-6]。然而，雪莲果自传入我国以来，与其相关的研究较少。近年来由于环境条件的变化和气候等原因，雪莲果种植的各个时期镰刀叶斑病、褐斑病、紫斑病等叶部病害发生较为严重，且有逐年加重的趋势，对其生产带来了较大的危害，但国内外学者对雪莲果叶部病害尤其是镰刀叶斑病进行系统研究的资料甚少。 因此，我们对雪莲果镰刀叶斑病进行病原菌鉴定和杀菌剂室内毒力测定，以期能筛选出高效、低毒、低残留的药剂，为雪莲果叶部病害的防治工作提供依据。
材料和方法
病原菌的分离、纯化及鉴定
样本采集及病原菌分离200—203年于西昌学院农业科学学院试验田采集具有典型病害特征的雪莲果叶片，并对照雪莲果镰刀叶斑病的田间症状（含叶面、叶尖和叶缘三个部位）特点及危害情况进行记录和描述。参照方中达的方法[7]对叶片上的病原菌进行分离、纯化，并经单孢分离获得纯培养菌株。
2病原菌形态特征观察与鉴定将菌株移于DA培养基上，置于26 ℃培养箱中，进行恒温培养，每日观察，并且记录病原菌的培养性状，并挑取已产孢的菌株制片，利用光学显微镜描述记载孢子形态及产孢结构，测量孢子大小。根据以上性状并查阅文献[8-0]，初步判定病原菌的种类。
3病原菌的科赫氏法则验证用所得的菌株配成孢子悬浮液，浓度为5×04孢子/mL，采用刺伤和无伤接离体叶片接种法，把孢子悬浮液涂抹于雪莲果的健康叶片上，以等量无菌水涂抹的叶片作为对照，然后将已接种的雪莲果叶片放入含充分湿润的无菌纸大培养皿中，置于26 ℃的恒温培养箱内保湿培养。每个处理3次重复，观察和记录结果，比较其发病症状与初次分离时的症状是否一致，并将发病叶片进行再次分离，培养获得的病原菌与原分离菌株进行比较观察，鉴定致病菌株的一致性。
2不同药剂对雪莲果镰刀叶斑病病原菌的室内毒力测定
2供试药剂供试药剂见表。
[FK（W7][HT6H][Z]表供试药剂[HTSS][STBZ]
[H5][BG（！][BHDFG2，WK4，WK5W]药剂生产厂家
[BHDG2，WK4ZQ，WK5ZQ0W]20%烯肟·戊唑醇悬浮剂沈阳科创化学品有限公司
[BHDW]400 mg/L氟硅唑乳油上海杜邦农化有限公司
[BH]0%苯醚菌酯悬浮剂浙江禾田化工有限公司
[BH]37%苯醚甲环唑水分散粒剂[3]上海沪联生物药业（夏邑）有限公司
[BH]25%丙环唑乳油江苏丰登农药有限公司[H][BG）F][FK）]
22室内毒力测定方法
采用生长速率法[-3]对雪莲果镰刀叶斑病病原菌进行杀菌剂室内毒力测定，分别将20%烯肟·戊唑醇悬浮剂稀释成00、005、00、050、00、2000、0000 mg/L；400 g/L氟硅唑乳油稀释成00、00、050、00、2000、5000、20000 mg/L；0%苯醚菌酯悬浮剂稀释成00、005、050、00、2000、5000、20000 mg/L；37%苯醚甲环唑水分散粒剂稀释成00、005、00、050、00、2000、0000 mg/L；25%丙环唑乳油稀释成005、00、050、00、500、000、2000 mg/L。药剂各浓度配制时均比设计浓度扩大50倍进行配制，待培养基溶化后，用移液管吸取不同浓度药液 mL注入49 mL DA中，得到50 mL含药培养基溶液，趁热将其摇匀后倒入灭菌培养皿中，冷却备用。每个浓度3次重复，以 mL无菌水加入49 mL DA制作的培养基作为对照。在无菌条件下，将已活化的直径为4 mm的菌丝块分别接种于含药的培养基及对照培养基正中央，每个培养皿接菌饼块，置于26 ℃的恒温下培养5 d，用“十”字交叉法测量菌落直径（cm）。同时计算供试药剂不同浓度对病菌的抑制率，通过最小二乘法求出各单剂的毒力回归方程，对方程进行显著性分析，再求出EC50、EC90。
[HS2][4]抑菌率=[SX（]对照组菌落平均直径-处理组菌落平均直径对照组菌落平均直径[SX）]×00%。
2结果与分析
2病原菌鉴定
2症状描述
该病主要危害雪莲果叶片，叶尖、叶缘和叶面均可发病，初期病部为褐色圆形或不规则小斑点，后期逐渐蔓延扩大为深褐色不规则形病斑，严重时形成穿孔，并逐渐开始向周围扩散（图）。
22病原菌的培养性状及形态特征
将该病原菌移于DA培养基上，于26 ℃的恒温箱中人工培养7 d后，菌落直径达到64～70 cm。气生菌丝羊绒状、淡粉色，易产生军绿色黏孢团型分生孢子座（图2）。无性生殖产生分生孢子，大型分生孢子为镰刀形，0～2个分隔，多数分隔不明显，大小为（469～265） μm×（29～254） μm（图3）；未发现小型分生孢子。厚垣孢子球形，表面光滑，单生或串生。
[CM（26]23病原菌科赫氏法则鉴定结果
通过离体接种法观察[CM）]
[FK（W][TTY2tif][FK）]
[FK（W][TTY3tif][FK）]
发现，刺伤接种的叶片发病症状特点与自然发病叶片症状基本相同，清水对照不发病。从接种的病组织中分离的病原菌与自然发病病组织中分离的病原菌形态基本一致。
根据病原菌形态特点、培养性状及科赫氏法则鉴定结果，并参考相关文献，认为从西昌地区雪莲果叶片上分离得到的病原菌为镰刀菌属（Fusarium sp）真菌。
22不同药剂对病原菌的室内毒力
由表2可知，5种杀菌剂的毒力回归方程均存在极显著的直线回归关系，5种杀菌剂对雪莲果镰刀叶斑病病原菌菌落的生长均具有较强的抑制作用。其中以20%烯肟·戊唑醇悬浮剂的抑菌效果最好，其EC50为099 2 mg/L，EC90也仅为33829 8 mg/L；其次为37%苯醚甲环唑水分散粒剂，EC50为0230 5 mg/L；400 g/L氟硅唑乳油的效果在供试药剂中相对较差，其EC50为0933 9 mg/L。[FL）]
[FK（W9][HT6H][Z]表25种杀菌剂对雪莲果镰刀叶斑病菌的毒力回归方程[HTSS][STBZ]
[H5][BG（！][BHDFG3，WK4。2，WK8。4W]药剂名称毒力回归方程t检验相关系数EC50（mg/L）EC90（mg/L）
[BHDG2，WK4ZQ，WK4ZQ2，WK8。4DWW]20%烯肟·戊唑醇悬浮剂y[DD（-][HT6]^[DD）]=0574 7x5402 722530 2[KG-3]0995 099 233829 8
[BHDW]400 g/L氟硅唑乳油y[DD（-][HT6]^[DD）]=0622 x508 55022 3[KG-3]0989 0933 907250 7
[BH]0%苯醚菌酯悬浮剂y[DD（-][HT6]^[DD）]=037 2x525 225606 0[KG-3]0989 30460 0 304067 3
[BH]37%苯醚甲环唑水分散粒剂y[DD（-][HT6]^[DD）]=0467 7x5298 262 8[KG-3]0984 50230 526706 8
[BH]25%丙环唑乳油y[DD（-][HT6]^[DD）]=0938 8x563 34308 8[KG-3]0997 90670 35538 2[H][BG）F]
注：[KG-3]表示t检验达极显著水平。[FK）]
[FL（2K2]3结论
通过对雪莲果镰刀叶斑病症状的观察，病原菌的培养性状、病原菌的产孢特性、孢子特点以及科赫氏法则证病，鉴定从病叶上所分离得到的病原菌为镰刀菌属（Fusarium sp）真菌，将其定为雪莲果镰刀叶斑病；采用低毒杀菌剂对其进行室内毒力测定结果表明，5种供试药剂的抑菌效果均较好，以20%烯肟·戊唑醇悬浮剂最佳，其EC50 仅为099 2 mg/L，EC90 为33829 8 mg/L。由于此试验仅在室内对雪莲果镰刀叶斑病病原菌进行毒力测定，20%烯肟·戊唑醇（SC）的田间防治效果以及是否具有促生作用和增产效果，有待进一步验证。
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