徐炫宗
（广东阿格蕾雅光电材料有限公司，广东 佛山 528333）
4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯，英文名4-(Naphthalene-2-yl)phenylboronic acid pinacol ester，CAS：1092390-02-7，分子量 330.23，分子式 C22H23BO2。硼酸频那醇酯类化合物是Suzuki、Miyaura偶联反应的重要中间体[1-10]，在药物、有机光电材料[11]等的合成中被广泛应用。高效液相色谱法（HPLC）适合分析沸点高、分子量大、强极性和热稳定性差的化合物，是应用范围最广的一种分析方法。目前，有关硼酸酯类物质的检测方法主要是高效液相色谱法[12-13]，但硼原子的空P轨道导致硼酸酯类样品在酸碱中都不太稳定[14]，因此对这类产品的纯度进行色谱分析时，往往出现主物质分解、在色谱柱中的保留弱、峰形差、方法稳定性差等问题，想得到准确可靠的分析结果难度很大。
试剂：4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯（99%）、色谱级乙腈、四氢呋喃、甲醇。
2.1 样品配制
四氢呋喃在HPLC中与其他常见溶剂的兼容性良好，因此选择四氢呋喃为溶剂。称取4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯25mg于烧杯中，加入适量四氢呋喃溶解后，转移至50mL容量瓶中，用四氢呋喃定容后摇匀。取适量至2mL棕色样品瓶中作为备测溶液，同时配制空白样品。
2.2 样品检测
2.2.1 色谱参数一
流动相为甲醇，色谱柱为Inertsustain C18 4.6mm×250mm×5μm，流速为 1.0mL・min-1，柱温为40℃，进样量5μL。检测仪器为带DAD检测器的安捷伦HPLC-1260，检测器（DAD）波长采集范围为190~450nm，总分析时长为20min。
2.2.2 检测波长的选择
按2.1的方法配制样品溶液，参照色谱参数一进行测定，主峰保留时间为8.2min，得到主峰的光谱图（图1）。样品在260.25nm处有吸收峰，因此确定260nm为4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯的检测波长。
图1 4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯的紫外吸收光谱图
2.2.3 方法的可行性验证
按2.1的方法配制样品溶液，按色谱参数一，在带UV检测器的赛默飞HPLC-U3000上进行检测，检测波长设置为260nm，连续进样2针。主峰保留时间为8.2min，发现从溶剂峰到主峰之间的基线明显有阶梯状的上抬（图2），很大可能是因为流动相中的甲醇为极性分子，导致4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯在流动相中不断分解为硼酸产物，而硼酸产物虽然在色谱柱中的保留较硼酸酯弱，但也存在紫外吸收，导致主峰的前基线上抬。由此可以看出，在这种色谱条件下，主物质不能保持单一分子状态，检测结果的准确性必然受到影响。
图2 4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯在色谱参数一下的色谱图
2.2.4 色谱参数二
且说文华斋的这恐怖一幕。伴随着“奉”的一声，峋四爷成了火人，裴主事，两名护卫，连同店门外的一个路人，都被眼前的景象吓得半死，面无人色。
流动相为乙腈，色谱柱为Inertsustain C18 4.6mm×250mm×5μm，流速为 1.0mL・min-1，柱温为40℃，进样量为5μL，检测波长为260nm，总分析时长为20min。
按2.1的方法配制样品溶液，按色谱参数二连续进样2针，主峰保留时间为5.2min，没有出现溶剂峰与主峰之间的基线上抬现象，但2针主峰的对称因子均为2.3，主峰有明显的拖尾现象。这是因为乙腈的极性比甲醇小，对4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯的作用没有甲醇强，使得目标物在分析过程中能保持原分子状态，因而改善了主峰前基线上抬的情况。主峰峰形拖尾可能是色谱柱里的硅羟基跟主物质发生作用而导致。
2.2.5 色谱参数三
流动相为乙腈，色谱柱为Venusil XBP C18 4.6mm×250mm×5μm，流速为 1.0mL・min-1，柱温为40℃，进样量为5μL，检测波长设置为260nm，总分析时长为30min。
将色谱柱改为二次封端的Venusil XBP C18 4.6mm×250mm×5μm柱，其他条件和2.2.4一致，按2.1的方法配制样品溶液，连续进样2针，结果显示主峰保留时间为5.7min，基线无上抬现象，主峰对称因子为1.1，峰形有明显改善。可见二次封端色谱柱降低了色谱柱填料中未键合的硅羟基数量，减轻了目标物在色谱柱中与硅羟基的作用，改善了峰形。但本方法的主峰保留时间不长，存在杂质分离度差、主峰里可能包裹有未分离的杂质等问题。
2.2.6 色谱参数四
流动相为乙腈∶水=9∶1（V∶V），色谱柱为 Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm，流 速 为1.0mL・min-1，柱温为 40℃，进样量为 5μL，检测波长为260nm，总分析时长为30min。
按2.1的方法配制样品溶液，按色谱参数四连续进样2针。调整流动相的极性后，主峰保留时间增加到10.9min，但溶剂峰与主峰之间重新出现了基线上抬现象，主峰峰形变差（图3）。这是因为流动相中的极性水分子导致4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯发生了分解，出现了与2.2.1同样的现象。
图3 4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯在色谱参数四下的色谱图
2.2.7 色谱参数五
流动相为乙腈∶水（1%甲酸）=9∶1（V∶V），色谱柱为Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm，流速为1.0mL・min-1，柱温为 40℃，进样量为 5μL，检测波长为260nm，总分析时长为30min。
据报道，用高效液相色谱法检测硼酸酯类物质时，在流动相中添加缓冲液能改善峰形，减少分解。在流动相的水相中添加1%甲酸后，按2.1的方法配制样品溶液，连续进样6针后发现，前面2针基线无上抬现象，主峰峰形也正常，第3针之后，溶剂峰与主峰之间的基线慢慢上抬，主峰拖尾因子逐渐变大。可见在流动相中添加缓冲液的分析方法，稳定性较差，且缓冲液对仪器、色谱柱或多或少会造成一定损害，在开发新的检测方法时尽量避免使用。
2.2.8 色谱参数六
流动相为乙腈，色谱柱为3根Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm串联，流速为1.0mL・min-1，柱温为40℃，进样量为5μL，检测波长为260nm，总分析时长为30min。
按2.1的方法配制样品溶液，按色谱参数六连续进样6针，主峰保留时间为12.8min，6针样品的重现性良好，均无基线上抬现象，主峰峰形良好，杂质分离度高。用本色谱参数分3次，对同一个4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯样品进行了6次平行检测，结果见表1。
由表1的数据可知，将3根二次封端的Venusil XBP 4.6mm×250mm×5μm色谱柱串联后，方法的重现性很好，无基线上抬、峰形差等现象。另外，选用纯乙腈为流动相，因乙腈的黏度小，在本色谱条件下的柱压力为12MPa左右，在普通的HPLC上就能使用本方法，无需配备超高效液相色谱仪。
表1 4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯的稳定性验证结果
在用色谱对具有硼酸酯结构的化合物进行纯度分析时，色谱条件的设置不合理，可能会出现主物质分解、主峰拖尾、方法的稳定性差等情况，直接影响分析结果的准确性。本文验证了4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯在各种高效液相色谱条件下的分析结果，得到结论：用纯乙腈为流动相，可降低产物的分解；
用二次封端色谱柱可降低柱效应；
将3根色谱柱串联，可提高杂质的分离效果，由此确定了既能保证峰形、又能实现杂质分离，且长期稳定性良好的4-(2-萘)苯硼酸频那醇酯高效液相色谱分析方法。本方法没有使用缓冲液，对色谱柱和仪器友好，可为其他硼脂类化合物的液相分析方法提供参考。