张玉倩，解伟伟，李德强，王可欣，刘剑，靳怡然
盐酸阿糖胞苷是一种嘧啶类抗代谢药物，是治疗白血病的基础药物，主要通过抑制DNA多聚酶而起作用，特异性作用于细胞分裂的S期，与其他类型的抗代谢药物无交叉耐药性[1-2]。目前，国内应用较多的是国药一心制药有限公司及海正辉瑞制药有限公司生产的注射用盐酸阿糖胞苷，但两个厂家要求的储存条件却不同，国药一心制药有限公司要求的存储温度为2～10 ℃，而海正辉瑞制药有限公司要求的则是常温保存(10～30 ℃)。但在医院药房及有些病区未按照说明书要求存放，而是置于常温下保存。而冷藏药品的质量受储存温度的影响很大，如果储存不当，就会缩短效期，使药物的效价降低或变质，甚至出现毒性反应，引发相关的医疗事故[3-4]。因此，本研究采用高效液相色谱测定常温放置下盐酸阿糖胞苷的含量，观察温度对盐酸阿糖胞苷稳定性的影响，同时观察常温放置的盐酸阿糖胞苷在不同溶媒中放置于不同温度条件下的浓度、pH值的变化情况，为临床安全用药提供一定参考。现报道如下。
1.1 药品与试剂 盐酸阿糖胞苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：140784-201001)，注射用盐酸阿糖胞苷(国药一心制药有限公司，批号1906121)，甲醇(美国Fishr Chemical公司)，0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液(石家庄四药有限公司)，磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸均为分析纯，水为超纯水。
1.2 仪器 高效液相色谱仪(美国Waters公司)，包括515泵和486紫外检测器；
KQ-30 B超声波台式清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；
pH-213台式酸度测定仪(北京天信伟业科贸)；
CPA 225 D分析天平(德国赛多利斯)；
XW-80 A涡旋混合器(上海医科大学仪器厂)；
MPC 201 E隔膜式真空泵(德国伊尔姆)；
HS-9240 A电热恒温鼓风干燥箱(上海和晟仪器科技)，GWF-8JA微粒分析仪(天津天河医疗仪器有限公司)，pH计(HANNA仪器)。
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液制备：精密称取盐酸阿糖胞苷对照品2 mg于10 ml的容量瓶中，用水溶解，制成浓度为0.2013 mg/ml的盐酸阿糖胞苷对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液制备：取冷藏注射用盐酸阿糖胞苷100 mg用水溶解稀释为20 μg/ml，即得供试品溶液。
2.2 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸盐缓冲液(取0.0106 mol/L磷酸二氢钾溶液与0.0104 mol/L磷酸氢二钾溶液等体积混合—甲醇(90∶10)流动相,检测波长为254 nm,流速为1 ml/min,柱温为35 ℃，进样量为10 μl。
2.3 方法学考察
2.3.1 专属性考察：分别取对照品溶液、5%葡萄糖注射液、供试品溶液1(注射用盐酸阿糖胞苷与5%葡萄糖注射液配伍)、0.9%氯化钠注射液、供试品溶液2(注射用盐酸阿糖胞苷与0.9%氯化钠注射液配伍)各10 μl进样分析，按照2.2项中色谱条件进样分析得色谱图(图1-5)，从图中可看出盐酸阿糖胞苷的峰型良好，溶媒在其出峰位置处无干扰，保留时间为4.8 min。
图1 对照品溶液色谱图
图2 5%葡萄糖注射液色谱图
图3 供试品溶液1色谱图
图4 0.9%氯化钠注射液色谱图
图5 供试品溶液2色谱图
2.3.2 线性关系：精密量取对照品溶液2、3、4、5、6、7 ml于50 ml的容量瓶中，用水定容摇匀，得到系列浓度为8、12、16、20、24、28 μg/ml的对照品溶液，按照2.2项下的条件进样分析。以盐酸阿糖胞苷的浓度(μg/ml)为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为Y=13254X-4084(r=0.9994)。
2.3.3 精密度考察：精密量取对照品溶液4、5、6 ml分别置于50 ml的容量瓶中，用水稀释定容摇匀，配置成低、中、高3种浓度(16、20、24 μg/ml)的溶液，按2.2项下色谱条件日内重复进样5次，测定峰面积。结果显示低、中、高3种浓度的相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)分别为0.06%、0.12%、0.20%；
按2.2项下色谱条件3种浓度的溶液重复进样3 d，测定峰面积。统计结果表明低、中、高3种浓度的RSD分别为0.28%、0.65%、0.92%，实验结果表明该方法精密度良好。
2.3.4 重复性试验：按照供试品的制备方法，平行制备3份。按2.2项下的色谱条件进样，测定峰面积。结果显示盐酸阿糖胞苷溶液的RSD为0.05%，表明本试验重复性良好。
2.3.5 回收率试验：按2.1.1项下的操作配置低、中、高3个浓度的溶液，按2.2项下色谱条件进样分析，将测得的峰面积代入回归方程得测量值，与加入的值作比较得到回收率。结果显示低、中、高3个浓度溶液的回收率分别为99.6%、99.2%、100.9%，说明本方法回收率良好。
2.3.6 稳定性试验：取2.1.1项下对照品溶液1 ml置于10 ml的容量瓶中，用水溶解定容得20 μg/ml的溶液，分别于放置0、1、2、3、4、5、6、10、12 h时进样分析。结果，盐酸阿糖胞苷的RSD值为0.65%，表明12 h内对照品溶液稳定性良好。
2.4 常温放置下盐酸阿糖胞苷稳定性
2.4.1 配伍方法：根据临床盐酸阿糖胞苷静脉滴注维持剂量，将冷藏放置及常温放置1、2、4、8、12、30、60、90、120 d的100 mg注射用盐酸阿糖胞苷分别溶于0.9%氯化钠注射液100 ml和5%葡萄糖注射液100 ml中并定容，依次编号为N1-10及G1-10(N：0.9%氯化钠注射液；
G：5%葡萄糖注射液)，每个样品平行三份，考察其稳定性。
2.4.2 含量变化：取供试品N1-10及G1-10，按2.2项下的色谱条件进样分析，记录色谱峰，按照外标法以峰面积计算药物含量。以常温放置天数为横坐标，将常温放置的盐酸阿糖胞苷浓度与冷藏放置盐酸阿糖胞苷浓度比较作为纵坐标，结果见图6。由图可看出常温放置2 d后，盐酸阿糖胞苷浓度开始下降，常温放置120 d的盐酸阿糖胞苷浓度相比冷藏放置下降10%。
图6 常温存储注射用盐酸阿糖胞苷与不同载体溶媒配伍后溶液浓度相对百分含量变化
2.4.3 pH值变化：取供试品N1-10及G1-10，每份供试品测定其pH值，并观察外观变化，结果见图7。经观察所有供试品溶液外观呈透明澄清，其中5%葡萄糖注射液中pH值在2 d后开始有上升的趋势，当其放置4个月其pH值上升到4.5左右，而0.9%氯化钠注射液的pH值无显著变化。
图7 常温存储注射用盐酸阿糖胞苷与不同载体溶媒配伍后溶液pH值变化
在实验过程中，先采用高春等[5]测定盐酸阿糖胞苷的方法，测定的检测波长为270 nm，色谱柱为Description C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为流动相:磷酸盐缓冲液(取Na2HPO4·12H2O 12 g与NaH2PO43 g置1 000 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度)—甲醇(90∶10)，但色谱峰的峰型不好，拖尾严重。后经查阅文献及多次试验，采用了检测波长为254 nm，色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为(0.0106 mol/L的磷酸二氢钾与0.0104 mol/L的磷酸氢二钾等体积混合)—甲醇(90∶10)，所得的色谱峰的峰型良好。
本实验测定了常温放置下盐酸阿糖胞苷(国药一心制药有限公司)与溶媒配伍后其含量、外观及pH值的变化，通过观察实验结果可发现，需冷藏放置的盐酸阿糖胞苷，放置于常温下对其质量是有影响的，尤其是盐酸阿糖胞苷的含量，常温放置2 d后其含量开始有较明显下降，经查阅文献[1,6]，发现注射用盐酸阿糖胞苷在储存过程中有可能分解为尿苷及阿糖尿苷，影响疗效。根据临床需要，当病情严重时采用冲击疗法最大剂量为2 g/m2[7-8]，如果使用储存不当的注射用盐酸阿糖胞苷则浓度会降低很多，影响疗效，最终贻误患者病情。注射用盐酸阿糖胞苷在临床主要用于治疗急性粒细胞白血病，而患者大多数肾功能较差，氯化钠注射液会加重患者肾脏负担，多采用5%葡萄糖注射液，《中国药典》规定葡萄糖注射液的pH值范围为3.2～5.5，但有文献[9]报道葡萄糖注射液的pH值在3～4时最稳定，在本研究中发现注射用盐酸阿糖胞苷常温放置其在5%葡萄糖注射液中pH值在2 d后开始有上升的趋势，当其放置4个月其pH值上升到4.5左右，如输注到患者体内，可能会对患者身体产生不利影响。因此，在临床工作中一定要注意药品的储存条件，以免对药品质量产生影响。
利益冲突：所有作者声明无利益冲突。
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