周 宇
肺癌是目前全球发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一，虽然目前我国肺癌的治疗手段已得到不断进步，但中晚期肺癌患者的预后仍较差，特别肿瘤的转移、复发极容易影响患者术后的生存期[1]。因此，早期寻找评估肺癌预后的有关分子靶点和转移诊断标志物，已成为目前科研和临床工作者研究的热点与难点。含SH2结构域的Ⅱ型5"肌醇磷酸酶2(SHIP2)是一种脂质磷酸酶，近年来已有研究发现，SHIP2蛋白在肿瘤发生发展中发挥重要价值[2]。Pleckstrin2(PLEK2)是最早发现于血小板及白细胞中的Pleckstrin蛋白家族成员[3]，既往有研究显示，PLEK2与癌细胞的迁移及侵袭密切相关[4]。但目前国内关于SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌临床预后的关系研究文献尚少。因此，本研究主要分析肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平及其临床预后意义，以期为肺癌的诊治提供参考。
1.1 一般资料
选取2016年8月至2018年8月我院确诊并进行手术治疗的97例肺癌患者作为本研究对象，其中年龄40～80岁，平均年龄(60.22±5.10)岁；
男性49例，女性48例。本研究已获得我院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合肺癌诊断标准[5]，并经病理检查已确诊；
②患者/家属知情同意；
③所有患者均进行手术治疗，且术前均未接受放、化疗或其他抗肿瘤辅助治疗。排除标准：①伴有脑血管疾病、免疫功能疾病、严重感染性疾病、神经系统疾病以及合并其他恶性肿瘤及其他影响免疫化结果的严重疾病者；
②严重心肝肾功能不全者；
③术前经放疗、化疗及生物等其他抗肿瘤治疗者；
④既往精神病史或存在语言、认知功能障碍者者；
⑤临床资料不全者。
1.2 方法
1.2.1 免疫组织化学检测SHIP2、PLEK2蛋白表达 收集手术切除的97例肺癌患者的癌组织标本及其癌旁组织(距离癌组织边缘5 cm以上的无癌肺组织)标本。经石蜡包埋、4 μm连续切片、脱蜡、水化以及苏木精染色后确定病变区域。加入3% H2O2溶液去除内源性过氧化物酶，采用柠檬酸修复液高温高压修复抗原，冷却后经PBS漂洗3次(每次3 min)，随后加入一抗(产于北京中杉金桥生物技术有限公司的兔抗人SHIP2单克隆抗体)4 ℃孵育过夜，PBS漂洗3次(每次3 min)，再加入二抗(产于北京中杉金桥生物技术有限公司的兔抗人PLEK2多克隆抗体)37 ℃孵育30 min，PBS漂洗3次(每次3 min)，最后使用DAB显色、苏木精复染、梯度乙醇脱水以及树脂胶封片，最后在镜下观察染色情况，其中阴性对照组以PBS为一抗。一切操作均严格按照SP试剂盒说明书进行。
1.2.2 SHIP2、PLEK2蛋白表达结果判定 免疫结果由两位高年资的病理医师共同采用双盲法完成，SHIP2、PLEK2阳性表达定位于细胞膜或细胞核中，并呈黄色或棕黄色颗粒状分布。病理医师每个切片随机选择4个视野(每个视野至少含100个细胞)，并按照细胞染色强度与阳性细胞百分比得出免疫组织化学染色评分。阳性细胞染色强度评分：无色为0分、浅黄色为1分、棕色为2分、深褐色为3分。阳性细胞占总细胞百分比：<5%为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、51%～75%为3分、>75%为4分。最终得分为阳性细胞百分比分数和染色强度平均分数的乘积，其中得分≥3分为高表达(阳性表达)，< 3分为低表达(阴性表达)[6]。
1.3 随访
所有患者以术后出院为观察点，并采用电话、门诊复诊或者上门等方式结合患者复诊病历随访3年，随访截止时间为2021年8月31日或患者发生转移或死亡，随访时间为2～40个月。
1.4 统计学方法
采用IBM公司SPSS 23.0软件进行数据分析，SHIP2、PLEK2表达等计数资料以百分比(%)表示，采用四格表χ2检验比较；
采用Kaplan-Meier法评估不同临床病理特征肺癌患者生存情况，单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析影响肺癌患者预后的相关因素，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2.1 肺癌组织、癌旁组织SHIP2、PLEK2蛋白表达比较
癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(P<0.001)，见表1。
表1 肺癌组织、癌旁组织SHIP2、PLEK2表达的比较(例，%)
2.2 SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系
SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌患者的年龄、性别、分化程度、肿瘤大小均无明显关系(P>0.05)；
但与TNM分期、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)，见表2。
表2 SHIP2、PLEK2蛋白表达与宫颈癌不同临床病理特征的关系/例
2.3 肺癌患者预后情况
肺癌患者3年生存率为42.27%(41/97)。SHIP2高表达、低表达组患者3年生存率分别为31.67%(19/60)、59.46%(22/37)；
PLEK2高表达、低表达组患者3年生存率分别为33.87%(21/62)、57.14%(20/35)。SHIP2、PLEK2高表达、低表达组3年生存率比较均存在统计学差异(χ2=6.253、4.965，P<0.05)。
2.4 肺癌预后单因素分析
单因素分析得出：TNM Ⅲ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达肺癌患者3年生存率均明显降低(P<0.05)，见表3。
表3 肺癌预后单因素分析(例，%)
2.5 肺癌预后影响因素多因素Cox回归分析
多因素Cox比例风险回归模型分析得出：TNM Ⅲ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)，见表4。
肺癌是呼吸系统常见肿瘤，早期常表现为咳嗽、低热、痰血等不具有典型特征的症状，因此常被忽视，而当多数患者由于呼吸困难、咳血等症状就诊时已进展至中晚期，而此时虽经放疗、化疗、手术等综合治疗能够控制疾病恶化，但仍有癌细胞因发生转移和扩散导致患者预后生存期不理想[7]。目前我国对肺癌的影响因素、发病机制等方面虽已有较多研究，但由于其发病机制复杂并受多因素影响，临床对肺癌的诊断和治疗效果仍不明显，因此，为了提高治疗效果、降低复发率和病死率，需进一步探寻早期对肺癌诊断的标志物和预后的影响因子[8]。本次研究主要是分析肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平及其临床预后意义。
本研究结果显示，癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(P<0.05)，表示SHIP2、PLEK2蛋白高表达与肺癌的发生密切相关。有相关研究显示，SHIP2蛋白表达在乳腺癌组织中呈高表达[9]。有研究显示，胃癌组织中PLEK2蛋白高表达含量高于癌旁组织[10]。同时本研究显示，SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌患者的TNM分期、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)，说明SHIP2、PLEK2高表达可能引起肺癌患者癌组织进一步恶化，可能在肺癌发展中起促癌作用。本研究结果显示，SHIP2、PLEK2高表达组患者3年生存率均明显低于低表达组(P<0.05)，说明SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌预后密切相关，其高表达提示预后不良。同时本研究进一步经单因素、多因素Cox分析结果显示，TNM Ⅲ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)，由此证实SHIP2、PLEK2高表达不仅与宫颈癌的发生、进展以及预后有关，同时能够作为评估患者预后的独立危险因素。
SHIP包括SHIP1和SHIP2两种同源物，N端为SH2结构域，既往认为SHIP1和SHIP2通过抑制PI3K/AKT信号通路途径来抑制肿瘤生长。SHIP2位于人类染色体11q13-14，参与细胞结构的重塑，肿瘤的浸润转移与细胞的粘附、迁移功能[11]。SHIP2作为肌醇5"磷酸酶家族成员，能够通过促进PIP3脱磷酸生成PIP2，抑制PI3K/AKT信号通路活化，从而达到抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用[12]。但既往较多研究均发现，SHIP2蛋白在口腔鳞状细胞癌、肝癌等肿瘤中呈高表达，并能够促进肿瘤细胞的迁移与凋亡[13-14]。PLEK2是普列克底物蛋白同源结构蛋白质之一，主要参与细胞骨架和细胞延伸调控等作用，有研究表示，PLEK2能够通过PI3K/AKT依赖和独立途径的T淋巴细胞迁移发挥关键作用[15]。同时既往研究显示，LEK2在胆囊癌肿瘤组织中表达能力升高时能够促进小鼠模型中的胆囊癌细胞迁移、入侵和肝转移[16]。因此当肺癌患者SHIP2、PLEK2蛋白高表达可导致癌细胞增殖，进而加重疾病恶化，故临床通过监测SHIP2、PLEK2蛋白表达可评估肺癌预后情况。
综上所述，肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达均为高表达，并与癌组织TNM分期、淋巴结转移及生存率有关，是影响肺癌患者预后的独立危险因素。但本研究样本量较少，因此更多结果需深入研究。
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