严维强，李雪平，帅 杨，刘天艳，付甫海，王佳平，杨定英，郑 植
（1. 遵义市妇幼保健院a.检验科 b. 产科，贵州 遵义 563000 ；
2. 正安县妇幼保健院检验科，贵州 遵义563000 ；
3. 湄潭县妇幼保健院检验科，贵州 遵义 563000）
无乳链球菌也叫B 群链球菌（GBS），是一种兼性厌氧的β 溶血的革兰阳性球菌。GBS 是健康人下消化道和泌尿生殖道内的正常菌群，同时也是引起孕产妇泌尿生殖道感染及新生儿感染的重要条件致病菌。围产期女性生殖道内微生态系统的平衡被打破后，GBS 可经产道上行而感染子宫及胎膜，导致孕妇早产、流产及新生儿脑膜炎、肺炎、败血症等，严重时甚至可导致新生儿死亡。母婴传播是新生儿GBS 感染的重要途径，因此加强对孕产妇进行泌尿生殖道GBS 携带情况及耐药性监测，对保障孕产妇和新生儿的健康具有重要意义[1]。本研究分析了在遵义地区三家医院就诊的961 例孕晚期女性生殖道GBS 的携带情况，并对培养分离出的菌株进行药物敏感性试验（药敏试验），以期为临床预防和治疗孕期GBS 感染提供合理的用药依据。
1.1 一般资料
1.1.1 样本来源 收集2021 年1 月至2022 年4 月就诊于遵义市妇幼保健院、正安县妇幼保健院和湄潭县妇幼保健院产科门诊的孕35 ～37 周孕妇的阴道及肛周分泌物961 份。孕妇年龄为16 ～42 岁，平均（27.30±4.50）岁，平均孕周（36.00±0.83）周。
1.1.2 仪器及试剂 VITEK 2 全自动细菌鉴定系统及配套的革兰阳性鉴定卡（购自法国生物梅里埃公司），B 群链球菌运送培养基（Ⅶ型，购自重庆庞通医疗器械有限公司），吡咯烷酮（PYR）释放剂和过氧化氢试剂（购自杭州滨和微生物试剂有限公司），药敏纸片（购自英国Oxoid 公司）。
1.1.3 质控菌株 CAMP 试验质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923，药敏试验质控菌株为肺炎链球菌ATCC 49619。
1.2 方法
1.2.1 标本采集 在孕妇知情同意后，由产科医生负责采集标本。按照美国疾病控制与预防中心（CDC）《围产期B 群链球菌感染及预防指南》（2010 修订版）推荐的采集方法对所有孕妇进行标本采集。长拭子用于采集阴道分泌物，短拭子用于采集肛周分泌物，采集完成后将拭子及时放入转运培养基中，并立即送检验科培养。
1.2.2 细菌培养及鉴定 将送检的含有阴道及肛周分泌物拭子的转运培养基直接放入培养箱（37℃、5%CO2）中培养。若72h 内转运培养基变色，则提示GBS 生长阳性，记录变色部位，并接种于哥伦比亚血平板上，置于培养箱中培养18 ～24h。观察菌落特点，挑取可疑菌落进行分离培养纯化，于第2 天进行鉴定，触酶及PYR 试验应均为阴性，CAMP 试验应为阳性，同时用VITEK 2 全自动细菌鉴定系统做最终鉴定。对于72 h 后培养基未变色的样本，同样将拭子转至哥伦比亚血平板上，培养18 ～24h，观察菌落形态，若有可疑菌落，则采用上述方法进行鉴定，若无可疑菌落，则报告未检出GBS。
1.2.3 药敏试验 采用纸片扩散法（K-B 法）对检出的GBS 进行药敏试验。药敏试验操作方法和结果判定参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）2022 年制定的相关标准。对红霉素耐药而对克林霉素敏感或中介的菌株补需行D- 试验（即诱导克林霉素耐药试验），操作方法及结果判读同样参考上述标准。
1.2.4 数据分析 采用WHONET 5.6 软件分析药敏试验结果。
2.1 三所医院孕妇阴道及肛周分泌物中GBS 的检出情况
三所医院961 例孕晚期孕妇中共检出58 例GBS携带者（共有GBS58 株），检出率为6.0%。三所医院收集标本数及GBS 检出率见表1。从表1 中可以看出，不同医院的GBS 检出率不同。
表1 三所医院孕妇阴道及肛周分泌物中GBS 的检出情况
2.2 不同年龄段孕妇GBS 的携带情况
不同年龄段孕妇GBS 的携带率呈现随年龄增长而上升的趋势，其中21 ～29 岁孕妇数量最多，30 岁以上孕妇GBS 的携带率最高。详见表2。
表2 不同年龄段孕妇GBS 的携带情况
2.3 58 株GBS 对抗菌药物的敏感及耐药情况
药敏试验结果显示，58 株GBS 对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、利奈唑胺及万古霉素100% 敏感，对四环素的耐药率最高，达77.6%，其次是克林霉素，耐药率为67.2% ；
GBS 对红霉素和左氧氟沙星的耐药率分别为56.9%和58.6%。详见表3。在58 株GBS 中，共检出红霉素耐药而克林霉素敏感或中介的GBS33株，其中D-试验阳性菌株13 株，阳性率为39.4%。
表3 58 株GBS 对抗菌药物的敏感及耐药情况[株（%）]
GBS 是导致孕妇围产期感染的重要病原体。GBS可通过产道上行感染或母婴垂直传播导致胎儿早产、死产以及新生儿肺炎、败血症等。孕妇感染GBS 后，其妊娠不良结局和新生儿不良事件的发生风险会有所增加。据报道，因GBS 感染所导致的菌血症，在美国所有菌血症产妇中约占20%。北京儿童医院的学者对200 例死亡新生儿的肺组织石蜡标本进行GBS 检测，发现其检出率为65%。近年来，GBS 引起的孕产妇及新生儿感染逐步引起围产医学界的重视[2]。美国CDC 建议妊娠35 ～37 周的孕妇进行GBS 常规筛查，我国发行的《孕前和孕期保健指南（2018）》也推荐妊娠35 ～37 周的孕妇进行GBS 常规筛查[3]。
本研究对就诊于遵义地区三所医院产科门诊的孕35 ～37 周孕妇的阴道和肛周分泌物开展GBS 筛查，发现检出率为6.0%，这与福州地区孕产妇GBS的检出率约5.6%[1]相近，而与研究报道的我国北京地区孕产妇GBS 感染率约为14.6% 及苏州地区孕产妇GBS 感染率约为4.1% 差异较大。本研究中不同医院（5.3% ～11.6%）以及不同年龄段孕妇（4.3% ～6.5%）GBS 的检出率存在一定差异，提示GBS 的检出率可能与地域及孕妇年龄具有一定的相关性[4]。本研究中的GBS 带菌率有随着孕妇年龄的增长而增加的趋势，因此有必要加强对围产期孕妇尤其是高龄孕妇开展GBS 常规筛查和有效治疗，以降低其不良妊娠的发生率及新生儿感染率。
对感染GBS 的围产期孕妇进行药物干预是预防孕妇、胎儿及新生儿出现不良结局的重要手段。对于GBS 感染者，青霉素常作为治疗的首选药物，氨苄西林通常作为备选药物，其中青霉素过敏者还可改用克林霉素或红霉素。本研究结果显示，所检出的GBS 对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、利奈唑胺和万古霉素均未见耐药，表明青霉素仍可作为遵义地区治疗和预防GBS 感染的首选药物。尽管CLSI 推荐对高危青霉素过敏者使用克林霉素和红霉素，但是，近年来对克林霉素和红霉素耐药的GBS 呈增多趋势。本研究中GBS 对克林霉素和红霉素的耐药率均超过50%，D-试验阳性率也高达39.4%。提示采用红霉素和克林霉素治疗GBS 感染时需要参考药敏试验结果[2]。本研究中GBS 对四环素的耐药率最高，达77.6%，对左氧氟沙星的耐药率为58.6%。同时，四环素和左氧氟沙星会对新生儿的骨骼发育产生不良影响，因此针对孕妇GBS 感染不推荐使用四环素和喹诺酮类药物治疗[5]。
综上所述，遵义地区孕晚期女性GBS 的携带率较高，本地区应对围产期女性开展GBS 常规筛查，对该菌携带者进行药敏试验，并有针对性地选择敏感抗生素进行治疗（青霉素可作为本地区治疗孕晚期女性GBS 感染的首选药物），从而改善母婴结局。
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