黄秋宇
（福建省龙岩市农业学校，福建 龙岩 364000）
在猪场的复养扩产过程中，由于养殖户片面追求扩大生猪产能，大量三元母猪进入种猪群，使猪蓝耳病再次成为猪场健康的一大难题。作为国际养猪界的“第一猪病”，由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）所引起，蓝耳病在猪群内的普遍感染，会导致猪群产生免疫抑制，且很容易继发或混合感染链球菌等条件致病菌，使之在非洲猪瘟的背景下更易快速蔓延。
即便我国已然实现猪蓝耳病疫苗的普遍免疫，但猪场感染率依旧较高。福建龙岩地区的养猪生产过程不管是否接种猪蓝耳病疫苗，都会有该病的发生，主要原因是后备母猪的健康管理不到位。因此通过对猪群后备母猪蓝耳病抗体水平的监测，可实现对其健康状况与免疫效果的全面了解，从而合理地调整后备母猪饲养管理，把握后备母猪进入种猪群时机，以便更好地控制蓝耳病的发生及流行。
产房仔猪可见腹部乳头根部发蓝（见图1），在断奶之前猪场发病死亡保育猪具有良好的长势，断奶2 周之后会出现呼吸道疾病，消瘦苍白、咳嗽，上升体温，同栏中较肥胖的猪可能突然倒地发病，持续一周后就会死亡，个别猪出现耳尖部发紫（见图2），会突然死亡，部分猪鼻部流出带血分泌物。
图1 乳头根部发蓝
图2 耳尖部发紫
解剖病死猪可见，其气管内的泡沫较多，心包膜增厚存在黄色积液，肺脏间质增宽、严重充血坏死（图3），脾脏梗死，肝脏肿大，淋巴结肿大出血，肾脏出现坏死点变色等系列病变。
图3 肺间质增宽
3.1 持续感染 肺泡巨噬细胞是感染的靶细胞，所以肺泡巨噬细胞具有先天性免疫反应，建成了抵抗的首道防线。病毒感染诱发的体液免疫和细胞免疫，能将循环中的病毒清除，但无法将淋巴组织内的病毒清除掉，致使病毒持续性感染。出现再次感染时，便有记忆性免疫反应出现，仅一部分免疫细胞拥有安全保护作用，此种非传统抗感染免疫存在的不确定因素较多，其中包含了猪群与个体猪间存在的天然免疫反应差异。受持续性感染影响，感染猪会成为短期病毒携带者，据相关研究显示临床症状消失2 个月内，病猪依旧具有传染性。同时还有研究指出，在感染猪的扁桃体与上呼吸道内，病毒能够存活的时间超过5 个月。感染病毒之后无法激发、IL-1、TNF、等细胞因子，是导致持续感染的重要因素，特别是对感染先天性免疫应答的作用很大，若无法激活则会影响后天性获得性免疫、先天性免疫反应抵抗和消除病毒的功能。
3.2 细胞免疫 感染之后，会出现以与病毒特异性细胞增殖为体征的细胞免疫。有研究表明，抗特异性淋巴细胞增殖发生在感染28d 后，高峰是第49天，到了第77 天开始降低，细胞增殖反应幅度会受重复感染影响，出现加大的情况，该增殖反应能够通过Ⅱ类抗原的抗体与阻断，说明此种反应对 淋巴细胞具有依赖性。感染后会出现细胞介导的免疫反应，反应会影响其感染程度，自然感染猪体内的淋巴细胞亚群出现了改变，在外周血中的细胞比例明显降低。因为通常和继发感染的联系紧密，所以，此种变化并不总是出现。细胞比例的变化，多发生在感染早期与康复期，分别是由细胞数目减少与细胞数量增加所引起。猪感染4 周后，会出现细胞变化，但要在感染后的9d～14 周能检测此种变化。
3.3 保护性免疫是体内中和抗体起到的作用 早期抗体可在感染后的7～9d 检测出来。在主动保护试验中早期抗体不能对攻毒的动物予以保护。而中和抗体是在感染之后的4 周或更迟时出现，由于中和抗体出现不规律和抗体产生缓慢，难以发挥保护性。有研究中和抗体能阻止病毒血症；
也有报道认为消除病毒血症，主要是中和表位抗体的出现。大量研究证实，大部分成功的疫苗免疫，均是中和抗体发挥保护作用。
4.1 猪场选取 该猪场存栏母猪1000 头。跟踪对象为本场自留后备母猪。该猪场2020 年后备母猪的疫苗免疫情况如下：
130 日龄 猪蓝耳病弱毒苗
150 日龄 猪瘟弱毒苗
160 日龄 一边猪乙型脑炎弱毒苗 另一边细小病毒灭活苗
170 日龄 猪蓝耳病弱毒苗
180 日龄 猪伪狂犬病基因工程苗
190 日龄 猪口蹄疫灭活苗
200 日龄 猪瘟弱毒苗
210 日龄 一边猪乙型脑炎弱毒苗 另一边细小病毒灭活苗
220 日龄 猪蓝耳病弱毒苗
230 日龄 猪伪狂犬病病毒基因工程苗
4.2 血样的采集及处理 根据生产需要监测2020年本场自留后备母猪，分别在上述疫苗程序免疫后一个月内采集猪前腔静脉血。血样采集每份3～5mL，用离心管保存，并完成编号，待30min 静置析出血清之后，做好冷藏工作送往实验室，离心10min，3000 转/min，将血清分离备用。
4.3 器材与试剂 酶标仪：美国Thermo Fisher MultiskanGO；
全自动酶标洗板机PW960；
恒温生化培养箱；
美国单道与8 道可调移液枪。用美国公司所产试剂盒检测猪蓝耳病抗体，保存环境为-4℃。
4.4 ELISA 抗体检测方法 遵循试剂盒的操作方法，所有试剂在使用之前应恢复到，至少1h 以上。轻轻振荡混合或旋转试剂，各个样品所使用吸头均为单独的一个。在实验基础上，于95%置信区间水平（CL）上，通过此试剂盒对猪蓝耳病抗体进行检测，特异性、敏感性均良好。
4.5 结果成立条件 阳性参照值与阴性参照值的平均值相减，应≥0.15。同时，阴性参照值平均值（NCX）需≤0.15。
结果判定：若不存在抗体，则提示阴性，若存在抗体，提示阳性。
采集时间安排在2020 年的1～12 月份的11个时间段，采集后备母猪血液样品共计282 份，各时间段猪蓝耳病抗体监测水平结果分析（见图4，图5），全年该猪场后备母猪有较高的蓝耳病抗体阳性率，S/P 值大于0.4 的阳性率均在100%以上，且阳性抗体值较高，具有较为稳定的抗体平均值，基本在1.5～2.5 区间，平均值为1.96。具有较大的离散度波动数值，平均值为23.11，最大为33.9，最小是10.04。就抗体离散度与平均值分布可见，后备母猪蓝耳病抗体水平变化规律趋于稳定，阳性率及S/P值合格，但是个别月份离散度偏高，因此对后备母猪的蓝耳病抗体监测非常有必要，防止离散度偏高的后备母猪直接进入种猪群，导致猪群的健康出问题。
图4 猪蓝耳病抗体S/P 值情况表
图5 猪蓝耳病抗体离散度情况表
本研究对该猪场后备母猪蓝耳病抗体血清抗体水平的监测与分析，并可以此判定后备母猪的蓝耳病免疫效果。根据该猪场实际生产情况分析其后备母猪蓝耳病抗体标准区间可定为：离散度分布在10～35 区间，抗体平均值表现在1.5～2。建立此标准区间，能够为我们借助血清学的定期数据分析和监测提供方便，通过对该场后备母猪蓝耳病疫苗免疫后抗体水平变化规律的掌握，能够在数据层面为后备母猪免疫方案的调整提供支持，同时，根据监测结果能对后备母猪群健康情况做有效分析，进而对其染病几率有更多掌握，采取更具针对性的预防措施和饲养管理。
结果提示，该猪场通过对免疫后的后备母猪群进行定期抗体水平监测，全年抽检后备母猪蓝耳抗体S/P 均值为1.96，11 次抽检样品之间离散度为15.2。实际生产中该场蓝耳病长期保持稳定状态，也未出现大面积流行与暴发其他疾病的情况，这与猪场采用的免疫程序、效果，及饲养管理有着很大关系。
本研究所选取的猪场在生物安全的严格管理下，长时间使用固定免疫程序及固定品牌疫苗，改善后备猪舍的饲养环境，后备猪群自身适应本场内的猪蓝耳病病毒，从而使得抗体水平整齐度升高，使免疫空白、免疫漏洞得以良好消除。
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