罗长琴， 朱显平，邹 璇，吴秋杰，黄小兰，谭春蓉
（1.重庆市万州食品药品检验所，重庆 404100；
2.重庆安全技术职业学院，重庆 404100；
3.重庆市南岸区茶园新城初级中学校，重庆 401336）
大豆作为我国主要的粮油兼用型作物，在国民生活中占有重要地位。近年来，国外大豆进口总量的减少与国内需求量的增加，大豆产量不足、需求增加的矛盾日益突出[1]，因此减少大豆种植中的虫害，提高大豆产量和质量至关重要。大豆蚜（Aphis glycines Matsu-mura）是一种通过刺吸危害栽培大豆的主要害虫之一[2]，研究表明，大豆蚜可使大豆减产20%～30%，严重年份可达50%以上[3]，吡虫啉是防治大豆蚜的主要化学药剂，因其对刺吸口器类害虫选择性好、击倒性高等特点深受农户的青睐[4]。
吡虫啉（imidacloprid）属新烟碱类内吸性杀虫剂，其作用机理是选择性抑制昆虫烟碱型乙酰胆碱受体，从而阻断神经系统信号正常传导，起到杀虫作用[5]，因其价廉、高效、低毒等优点[6]，被广泛用于农产品的生长过程中[7]，在保证农产品的品质和提高产量方面有着重要的作用，但频繁使用或者超标使用，不仅会造成环境污染，且会造成大豆中吡虫啉的残留[8]，通过食用在人体内蓄积，会引起慢性中毒，导致疾病的发生[9-10]。因此，为了保障吡虫啉使用的安全性和有效性，我国对农产品中吡虫啉的残留量做出限值规定，其中大豆中为0.05 mg/kg[11]。
目前，吡虫啉残留量的分析方法主要包括高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）[12]、超高效液相色谱-串联质谱法(High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）[13]、气相色谱法（Gas Chromatography，GC）[14-15]、气相色谱质谱法（Gas Chromatography Mass Spectrometry，GC/MS）[16]等。其中，HPLC-MS/MS 法具有灵敏度高、选择性强、分析时间短等优点，为常用的农残类药物的分析方法。
研究采用乙腈提取、QuECHERS 净化包除杂、氮吹后复溶，结合HPLC-MS/MS 法建立了大豆中吡虫啉的分析方法，为大豆中吡虫啉残留检测提供技术参考。
1.1 主要试剂
乙腈、甲醇均为色谱纯，德国默克股份公司提供；
甲酸（色谱纯），上海安谱实验科技股份有限公司提供；
QuECHERS 净化包（N -丙基乙二胺150 mg、石墨炭黑15 mg、硫酸镁885 mg），迪马科技公司提供；
氯化钠（分析纯），重庆川东化工集团有限公司提供；
吡虫啉标准品（98.1%），北京墨坛提供。
1.2 主要仪器
QUINTIX224-CN 型电子天平，德国赛多利斯科学仪器（北京）有限公司产品；
MILLI Q Advantage A10 型超纯水机，美国MILLIPORE 公司产品；
IKA MS3 Digital 型涡旋仪，德国艾卡产品；
KQ-800DBDZ 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品；
3-30ks 型离心机，德国Sigma 产品；
Turbovaplv 型氮吹仪，瑞典Biotage 公司产品；
TSQ Series 型液相质谱仪，赛默飞世尔科技（中国）有限公司产品。
1.3 试验方法
1.3.1 标准溶液的配制
精密称取吡虫啉标准品0.010 84 g 于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，既得标准储备液，再逐级稀释，用甲醇配制成质量浓度为5.317，10.634，21.268，42.536，85.072，106.340，127.608，170.144 ng/mL 的标准工作系列，备用。
1.3.2 样品前处理
在我眼中，音乐是神圣的。神圣的来源是我对它的热爱。难过的时候，我就会听一首《女孩，别哭》，脸上就挂起了微笑；
生气的时候，我就会听一首《快乐宝贝》，心中的气就云消雾散了；
考试成绩不好时，就会听一首《童年》，提醒自己：珍惜时光，好好学习。
取大豆样品经粉碎机粉碎，过20 目筛，混匀，准确称取5.00 g 置于50 mL 离心管中，加入5 mL 超纯水，涡旋1 min，放置5 min，待样品复溶完全，再加入乙腈10 mL，涡旋1 min，超声（100 W）提取5 min，取出，加入氯化钠3 g，再涡旋30 s，以转速8 000 r/min 离心3 min。将上层有机层转入15 mL净化管中，涡旋1 min，以转速8 000 r/min 离心3 min，取全部上清液于氮吹管中，于40 ℃水浴氮吹至近干，用甲醇复溶至1.00 mL，过0.22 μm 有机滤膜，即得上机待测液。
1.3.3 分析条件
（1）液相条件。InfinityLab Poroshell 120 EC-C18型色谱柱（2.1 mm×100 mm×1.9 μm），柱温40 ℃，进样量3 μL，流速0.2 mL/min，流动相：0.1%甲酸水（A）和乙腈（B），详见表1。
流动相梯度洗脱见表1。
表1 流动相梯度洗脱
（2）质谱条件。电喷雾离子（ESI）源，多反应监测（MRM）模式检测，正离子扫描模式，电喷雾电压4 000 V，毛细管温度350 ℃，辅助气压力10 Arb，反吹气0 Arb，吡虫啉定量离子对为256.2/209.0，定性离子对为256.2/175.0，碰撞能力为21/5 V，去簇电压为72 V。
1.4 数据处理
用赛默飞液质自带数据处理软件进行数据处理，采用Excel 对数据进行分析。
2.1 响应值和选择性
在设定的条件下对标准样品进行分析。
由图1 可知，吡虫啉定量离子和定性离子的响应值能达到105和104数量级，且峰型尖锐，无杂质峰干扰，出峰速度快（保留时间为5.42 min）；
而空白样品的基线波动仅为103和101数量级，也无杂质干扰，表明该仪器方法可用于吡虫啉的定量测定。
图1 吡虫啉标准品（106.340 ng/mL）和空白样品MRM 色谱图
2.2 标准曲线及线性范围
以峰面积（Y）和对应的质量浓度（X，ng/mL）作线性方程，在5.317～170.144 ng/mL 内，吡虫啉质量浓度与对应的峰面积呈良好线性关系，相关系数R2为0.999 5，具有良好的线性关系。
2.3 方法学验证
2.3.1 检出限和定量限
以空白样品进行加标试验，以3 倍信噪比计算检出限（LOD），10 倍信噪比计算定量限（LOQ），利用上述试验方法测定，计算得检出限为3.0 μg/kg，定量限为10.0 μg/kg。
2.3.2 保留时间重复性以21.268 ng/mL 的标准溶液在上述仪器条件下进行重复测定6 次，吡虫啉的保留时间分别为5.42，5.43，5.42，5.44，5.43，5.45 min，精密度RSD 为0.16%，表明出峰时间稳定，可作为目标物定性分析。
2.3.3 回收率及精密度
取空白基质加入低、中、高（10，50，100 μg/kg）3 个质量浓度的标准溶液，按上述方法进行含量测定。
大豆中的吡虫啉回收率和相对标准偏差（n=3）见表2。
表2 大豆中的吡虫啉回收率和相对标准偏差（n=3）
由表2 可知，回收率为88.6%～102.3%，相对标准偏差（RSD）为1.1%～2.3%。结果表明，回收率和精密度结果均能达到国标的要求，可用于定量分析。
2.4 实际样品的测定
2021 年从重庆市超市、农贸市场抽取大豆样品100 批次，检测结果均为未检出，表明目前大豆中吡虫啉的残留量控制较好。
采用乙腈提取，QuECHERS 法净化，以超高效液相色谱-四极杆质谱联用法分子，建立了大豆中吡虫啉的检测方法。通过方法学评价，吡虫啉保留时间相对稳定；
在线性范围5.317～170.144 ng/mL内具有良好的线性关系；
检出限为3.0 μg/kg，定量限为10.0 μg/kg。该方法操作简单、快速、灵敏度高，适用于大豆中吡虫啉的快速检测。实际样品的检测均为未检出，表明近年来大豆中吡虫啉残留的监管起到了一定的效果。