谭寅凤
（吉林市人民医院，吉林 吉林 130021）
致泻性大肠杆菌（DEC）是引起腹泻的主要致病菌，根据其侵袭性及毒性，临床将其分为5类，分别为：致病性大肠杆菌（EPEC）、产毒性大肠杆菌（ETEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）和聚集性大肠杆菌（EAEC）。随着诊疗技术的不断提高，将分子诊断技术与传统的分离方法相结合，能提高致泻性大肠杆菌引起食物中毒的病原菌检出率[1]，有利于临床对症采取治疗措施，提高疾病治愈率，促使患者早日康复。下面对500份粪便样本实施致泻性大肠杆菌检测，采用荧光PCR法联合传统分离方法，分析致泻性大肠杆菌阳性率及各相关病原菌检出率，具体研究内容如下。
1.1 标本来源 2018年6月-10月选取我省几个具有代表性监测医院送检的的500份粪便样本，均为腹泻患者。
1.2 试剂与仪器 培养基：GN增菌液；
试剂盒：荧光诊断试剂盒购自上海之江生物科技有限公司；
仪器：荧光PCR仪，型号为Rotor-gene 6000（Corbett）。
检测方法：采集的粪便采用GN增菌液，共收集1 mL增菌液，以13000 r/min进行离心处理，时间为2 min，去尽上清，混合入100 μL DNA提取液，置入沸水10 min，以13000 r/min进行离心处理，时间为5 min，取上清，以此作为RT-PCR反应的模板DNA。荧光PCR的反应体系及扩增程度严格按照说明书流程实施操作，其程度为，置入37oC环境中2 min，置入94oC环境中2 min，置入93oC环境中15 s转换成60oC环境中60 s，共循环40次。
2.1 500 份粪便样本病原菌检出情况 500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%，EIEC为2.40%，ETEC为1.40%，无EIEC500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%，EIEC为2.40%，ETEC为1.40%，无EIEC。
表1 病原菌检出分布时间
2.2 病原菌检出分布时间 致泻性大肠杆菌6月份检出率最高，为39.10%，其次为7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份检出率最高，可见6月是疾病的高发期，详见表1。
致泻性大肠杆菌与普通致病大肠杆菌形态及生化特征无明显却别，因此容易出现混淆的情况，只能从血清学角度进区分。食品标准GB 4789公布，致泻性大肠杆菌银从血清凝聚方面入手，将国际上常见种类加以分类，确定血清型后实施毒力试验，但该种检测方式耗时长且浪费人力物力，病原菌阳性检出率也不高，不利于病原检测工作的开展。随着分子生物技术的发展，其运用到各种疾病的检测中，荧光PCR法在临床使用范围广泛，将其与传统分离方法相结合，能快速获得诊断结果，且灵敏性极高，能提高操作人员工作效率，使其劳动强度降低，简单省时，具有极高的临床使用价值[2]。通过本次研究结果可知500份粪便样本，致泻性大肠杆菌检出95份，检出率为19.00%，各种病原菌检出率EPEC最高，为8.20%，其次为EAEC，7.00%；
致泻性大肠杆菌6月份检出率最高，为39.10%，其次为7月份，占16.58%，EPEC、ETEC、EIEC及EAEC均6月份检出率最高，可见6月是疾病的高发期，满足腹泻病的流行病学特点。
综上所述，采用荧光PCR法联合传统分离方法检测致泻性大肠杆菌准确率高，其次，EAEC及EPEC是致泻性大肠杆菌的主要病原菌。
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