殷力佳，陈 惕，张 建
（江苏省常熟市第一人民医院，江苏 常熟 215500）
乳腺癌是女性常见的癌症疾病。特指乳腺鳞状上皮细胞在各种致癌物作用下的异常繁殖，它的早期症状是乳房肿块和乳房皮肤上的异常酒窝状变化，随着病情的进一步发展，机体的肿瘤细胞可向肺、骨、肝、脑等处迁移。近年来，乳腺癌的患病率逐渐升高，乳腺癌患者的死亡原因通常不是继发性恶性肿瘤，而只是远处人体器官的转移[1]。临床上迫切需要新的标志物来筛选乳腺癌发生转移风险较高的患者，为乳腺癌的个体化治疗提供帮助，同时为治疗乳腺癌转移提供新的靶标。与此同时为乳腺癌转移的诊治给予新的靶点。Polo样激酶1（PLK1）是一类广泛存在于真核细胞中的呈周期依赖性的丝/苏氨酸蛋白激酶，其结构与功能均十分保守。它在细胞有丝分裂中扮演重要角色，与细胞有丝分裂期多个事件密切相关，如中心体复制、纺锤体形成、染色体分离及胞质分裂等[2-4]，可有效控制癌细胞的增殖和诱导癌症干细胞的凋亡，但对正常细胞没有明显影响，因此PLK1在恶性肿瘤的靶向药物治疗中具有广阔的应用前景。P53是一种抑癌基因，是肿瘤分子生物学研究的热点。进一步探究P53的调控机制，对于揭开肿瘤的发生原因以及寻找更合适的治疗策略都具有重要意义。本研究采用免疫组化SP法检测PLK1和P53在人乳腺癌中的表达情况，探讨两者与乳腺癌临床医学病理特征的关系及其相互关系，进一步探讨它们与乳腺癌的发生发展和肿瘤生物学行为的关系，从而为乳腺癌可能的靶向治疗提供实验线索。
1.1 病例来源 42 例乳腺癌患者（观察组）和16 例乳腺良性增生患者（对照组）均为常熟市第一人民医院2015年—2021年手术治疗并取出标本，患者均为女性。所有患者术前均没有做过化学治疗、放射治疗或者免疫治疗，临床医学病理资料详实，年龄32～70 岁。观察组病理类型：浸润性导管癌19例、浸润性小叶癌10 例、其他13 例；
病理分期：Ⅰ期12 例、Ⅱ期18 例、Ⅲ期12 例；
淋巴结转移：≥4 个淋巴结14 例，＜4 个淋巴结28 例；
组织学分级：G1 11 例，G2 15 例，G3 16 例。
1.2 主要试剂 PLK1单抗购自Millipore公司，P53单抗购自福州迈新生物技术开发有限公司（即用型），均为鼠抗人单抗；
DAB染色检测试剂盒和SP免疫组化检测试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。
1.3 检测方法 对上述乳腺组织标本行免疫组织化学S-P法染色。将给定的PLK1和P53阳性切片作为阳性对照，用PBS作为阴性对照，实际操作以使用说明为准，PLK1和P53均使用DAB进行着色。PLK1在细胞核中表达（图1），P53也在细胞核中表达。判断结果：随机选取5个高倍镜视野。表达强度：0分为无色，1 分为淡黄色，2 分为黄褐色，3 分为深褐色。阳性细胞百分比：0 分为无阳性细胞，1 分为阳性细胞≤10%，2 分为阳性细胞11%～50%，3分为阳性细胞51%～80%，4 分为阳性细胞＞80%，最终得分以表达强度和阳性细胞百分比相乘计算，0～2 分为-、3～5 分为+、6～9 分为++、10～12 分为+++。因此，≤6 分计为负，＞6 分计为正。
图1 乳腺癌组织中PLK1在细胞核阳性表达（10×40）
1.4 统计学分析 应用SPSS 21统计软件进行数据统计分析。PLK1、P53在乳腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系采用χ2检验，PLK1与P53在乳腺癌组织中表达的相关性采用Spearman等级相关分析法，以P＜0.05为差异有统计学意义。
PLK1和P53在乳腺癌中的阳性率分别为54.8%（23/42）、66.7%（28/42），在乳腺良性增生组织中均呈阴性表达。表1提示，经分析PLK1的表达受病理分期、组织学分级、雌激素受体（ER）、雌激素蛋白激酶（PR）的影响（P＜0.05），但不受年龄、病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移、人上皮细胞生长因子蛋白激酶-2（HER-2）的影响（P＞0.05）。P53的表达受病理分期、肿瘤大小、淋巴结转移、ER的影响（P＜0.05），但不受年龄、病理类型、组织学分级、PR、HER-2的影响（P＞0.05）。
表1 乳腺癌中PLK1和P53的表达及其与病理特征的关联性（例）
表2提示PLK1和P53蛋白在乳腺癌中的表达成正相关（r＝0.575，P＜0.01）。
表2 乳腺癌中PLK1蛋白表达及其与P53的相关性（例）
PLK1是一种相对高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，4种报道的乳腺癌病毒具有相似的结构，N端是相对高度保守的ATP结构域，C端是特征性的PBD结构域[5]。PLK1引起蛋白激酶被抑制，提高乳腺癌体细胞对放射性的敏感性[6]。在肝癌晚期的体细胞中，PLK1的蛋白激酶结构域与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶39（STK39）相互起反应，用于上下游调节因子磷酸化PLK1，促进恶性肿瘤的发生[7]。为了研究PLK1的作用，Smith等[8]进行了一个有趣的实验。他们采用显微注射法PLK1 mRNA导入NIH3T3细胞系，导致软琼脂中致癌因子和人体细胞异常聚集，粉末的快速生长发育和裸鼠产生恶性肿瘤的能力表明PLK1可能促进恶性肿瘤的发生和生长，也提醒PLK1具有致癌基因的特性。多个国家的研究人员经过多项研究发现PLK1在多种实体瘤中的表达非常高，具有相关的临床意义，在非小细胞肺癌[4]、白血病[9]、非黑色素瘤[10]、胃癌[11]等中均有过表达，并与一些肉瘤的分子生物学方法疗效差有关。本研究发现，PLK1在乳腺癌中的表达与年龄、病理类型、肿瘤大小、HER-2无关，但与淋巴结转移、病理分期、组织学分级、ER、PR有关。说明PLK1可以促进恶性肿瘤的发生和发展，控制细胞周期，促进细胞增殖，ER阴性的乳腺癌细胞具有很强的增殖能力。该分析结果提示PLK1可以促进ER阴性乳腺癌细胞的增殖，由于临床分期常用来帮助估计患者预后及指定治疗方案，所以PLK1与肿瘤的密切关系可能有助于PLK1成为新的肿瘤生物学行为判断指标。兰斌等[12]认为PLK1在肿瘤患者身体中的表达与患者的身体恢复有关，肿瘤患者PLK1表达结果提示表达高的患者恢复更差。这也许能为我们提供一个判断患者预后的新的分子标志物。
野生型P53蛋白在人体细胞中的药物半衰期仅为15～30 min，当体细胞受到氧气不足和DNA损伤等威胁时，p53蛋白会迅速在人体细胞中积累，受到刺激来控制一系列基因，基因表达可引起细胞周期中断、细胞衰老进一步出现凋亡，进而防止细胞癌变[13]。体细胞中P53所有正常功能的退化往往导致恶性肿瘤的产生，TP53基因的基因突变是P53降解的关键机制，其他蛋白质或未编号RNA的影响也可以使其降解[14]。本研究发现，在乳腺癌中P53蛋白的表达与淋巴结转移和病理分期密切相关，并随着淋巴结转移和病理分期增加而增加。孙咏梅等[15]在宫颈鳞癌中P53的分析中也得到了类似的结果，这表明P53蛋白在乳腺癌的浸润和转移中具有关键作用，肿瘤患者中有PLK1表达越高者提醒恶性肿瘤很可能已经转移。Guarneri等[16]研究证实，恶性肿瘤P53与放疗后的生存率密切相关，即高P53的恶性肿瘤放化疗后生存率较低。因此，对恶性肿瘤中P53的研究将有助于选择必须辅助治疗的恶性肿瘤患者并指导特定药物治疗。据研究[17]，在G2期DNA损伤检测点信号转导全过程中，PLK1可立即与P53 DNA融合区融合，抑制P53的磷酸化，抑制P53的基因表达，进而危及P53的活力，诱导细胞衰老，P53可能是PLK1的疗效靶点。本研究表明，PLK1和P53蛋白在乳腺癌组织中的表达成正相关（r＝0.575，P＜0.01）。此外，PLK1除了控制癌细胞的细胞周期外，很可能还基于抑癌基因的调控参与了乳腺癌的发展。
总而言之，PLK1和P53在乳腺癌组织中的基因表达与乳腺癌的转移密切相关，两者可作为评估乳腺癌发生和转移的有效指标值，两者的协同检测对于乳腺癌的诊断和鉴别具有重要的临床意义。
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