【摘要】 目的:研究三阴乳腺癌中EGFR与VEGF的表达及意义,并探讨其与临床病理参数之间的关系。方法:应用免疫组化MaxVision法检测45例三阴乳腺癌中EGFR与VEGF的表达,并分析它们与三阴乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、病理类型、淋巴结转移及p53、E-cad的关系。结果:EGFR和VEGF在三阴乳腺癌组的表达显著高于非三阴乳腺癌组(P0.05);但在有淋巴结转移及E-cad阴性的三阴乳腺癌中EGFR的阳性表达率显著高于相应对照组(P0.05);但在淋巴结转移、p53分组间的表达上差异有统计学意义(P0.05);however,the expression of EGFR in lymph node metastasis and E-cad - negative group was significantly higher than the corresponding control group(P0.05);however,the expression of VEGF in lymph node metastasis and p53 - positive group was significantly higher than the corresponding control group(P2cm 25例。腋下有淋巴结转移26例,无淋巴结转移19例。p53蛋白阳性24例,阴性21例,上皮钙黏蛋白(epithelia cadherin,E-cad)阳性33例,阴性12例。所有病例术前均未做过放疗、化疗、内分泌治疗等。另选45例非三阴乳腺癌作为对照组。
1.2 试剂 即用型鼠抗人EGFR单克隆抗体、即用型鼠抗人VEGF单克隆抗体、即用型快捷免疫组化MaxVision试剂盒(鼠/兔)及DAB显色剂,均购于福州迈新生物工程有限公司。
1.3 免疫组化检测 采用即用型快捷免疫组化MaxVision法检测EGFR、VEGF在三阴乳腺癌中的表达。阳性对照:用福州迈新生物工程有限公司提供的EGFR、VEGF阳性对照片作为阳性对照;阴性对照:均用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。4 μm切片脱蜡、水化、胃酶(EDTA)修复及内源性过氧化酶阻断;滴加EGFR、VEGF 40 ℃过夜;滴加即用型MaxVision试剂(室温下5 min);DAB显色液显色;自来水冲洗,苏木素复染,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
1.4 结果判定 EGFR定位于胞膜和胞浆,EGFR定位于胞浆,光学显微镜下胞膜或者细胞质中出现棕黄色或褐色颗粒为阳性。采用阳性细胞百分比并结合显色强弱进行判断。计数100个细胞呈现的阳性细胞数,结合显色强弱分别为:阴性(-)不显色;弱阳性(+)25%;中度阳性(++)26%~50%;强阳性(+++)>50%。
1.5 统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行处理,计数资料采用 字2检验,以P0.05);在有淋巴结转移及E-cad阴性的三阴乳腺癌中EGFR的阳性表达率显著高于相应对照组(P0.05);但在淋巴结转移、p53分组间的表达上差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
3 讨论
EGFR是一种存在于细胞膜表面的酪氨酸激酶受体,具有酪氨酸激酶活性,在正常细胞和恶性肿瘤细胞的生长调控方面起重要作用。它可以通过受体的表达、突变、生长因子受体自分泌环的活化、特定的磷酸酶失活等多种机制促进细胞恶变,其中EGFR的过度表达在涉及肿瘤发生和发展的机制中最为常见。许多研究表明[3],约1/3的人体恶性肿瘤都存在EGFR的过表达,尤其在非小细胞肺癌组织中,表达率高达80%左右。笔者研究发现,EGFR在TNBC中高表达,表达率为53.3%,这和Nielsen[4]报道的EGFR在TNBC的表达率为45%~70%的统计数据一致,故而EGFR的过表达可以作为靶向治疗TNBC的突破点。E-cad是一种钙依赖性跨膜蛋白,由CDHI基因编码的,在大多数上皮组织中表达,可以调节肿瘤细胞与周围环境的关系。E-cad粘附功能的丧失,可以诱导肿瘤细胞向高侵袭的表型转化。Czyzewska等[5]研究证实,E-cad表达的缺失可以作为胃癌转移及基本进展和预后的指标,研究表明,在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌等许多高侵袭的人类肿瘤中,都存在E-cad表达的异常,尤其在肿瘤转移灶内表达减少和缺失。本实验发现在E-cad缺失的TNBC中EGFR高表达,也从另一方面证实了TNBC高侵袭和易转移的原因,因此,联合检测EGFR和E-cad的表达,可以为判断TNBC的侵袭转移和预后提供一定的依据。
VEGF作为已知最强的血管渗透剂和内皮细胞特异性有丝分裂原,在许多正常组织呈低水平表达,但在许多恶性肿瘤中存在过表达,并且与肿瘤的发生、发展密切相关[6]。本研究显示,TNBC中VEGF的表达水平明显高于非三阴乳腺癌,这和Corkery [7]的研究结果一致。Linderholm等[7]用酶免疫吸附法测定679例原发乳腺癌患者VEF的水平,结果显示,TNBC中的VEGF值(8.2 pg/ug)明显高于非三阴乳腺癌中的VEGF值(2.7 pg/μg),差异有统计学意义(P<0.001),且TNBC的无病进展时间和总生存期短于非三阴乳腺癌,这与VEGF的高表达直接相关。Nishimura等[8]的研究也表明,p53过表达者VEGF水平较高,且患者易复发,预后差,这和本实验结果一致,即VEGF在p53阳性组和淋巴结转移组高表达。Ryden 等[9]应用组织微阵分析显示TNBC较非三阴乳腺癌高表达VEGF-2,且VEGF-2的高表达与TNBC的5年生存率降低有直接关系,因此,抗VEGF的生成可以作为治疗TNBC的新靶点,从而提高TNBC的治愈率及生存率。
综上所述,EGFR、VEGF在TNBC中过表达,且与E-cad、p53、淋巴结转移有一定的相关性,联合检测EGFR、VEGF、E-cad及p53的表达,对判断TNBC的复发转移及预后有一定的意义,是综合评价TNBC的重要标志物。EGFR、VEGF有可能成为TNBC分子靶向治疗的新靶点和突破口,从而改变TNBC治疗的临床模式,以提高该病的治愈率和生存率,改善患者的生活质量。 参考文献
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[9] Ryden L, Jirstrom K, Haglund M, et al. Epidermal growth factor receptor and vascular endothelial growth factor receptor 2 are specific biomarkers in triple-negative breast cancer.Results from a controlled randomized trial with long-term follow-up[J].Breast Cancer Res Treat, 2010, 120(2): 491-498.
(收稿日期:2012-08-16) (本文编辑:车艳)
