[摘要] 目的 检测Tiam1和MMP-14在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈中的表达，了解其在宫颈鳞癌的发生发展以及浸润转移方面的作用。 方法 收集某院病理科2010年6月～2012年6月手术切除宫颈鳞癌标本100例，宫颈上皮内瘤变30例，正常宫颈10例。采用免疫组化二步法检测两者在宫颈组织中的表达情况。采用SPSS18.0软件包进行统计分析。 结果 Tiam1在宫颈鳞癌中的表达高于CIN和正常宫颈（P ＜ 0.01）；Tiam1的表达与分化程度、深肌层浸润和淋巴结转移有关（P ＜ 0.05）；MMP-14在宫颈鳞癌的表达高于CIN和正常组织，且在CIN的表达亦高于正常组织（P ＜ 0.05）；MMP-14的表达与深肌层浸润和淋巴结转移有关（P ＜ 0.05）；两者在宫颈鳞癌的表达强度呈正相关。 结论 Tiam1与MMP-14可能都参与了宫颈鳞癌的恶性发展过程，且与宫颈癌的深肌层浸润、淋巴结转移密切相关。两蛋白可能在宫颈鳞癌的发生发展过程中具有协同作用，表达阳性的癌细胞可能具有更强的浸润转移的潜能。
[关键词] Tiam1；MMP-14；宫颈鳞癌；免疫组化
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）28-0056-03
T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（T lymphoma invasion and metastasis factor 1，Tiam1）属于原癌基因，具有影响细胞形体极化、调节细胞骨架重组、促进细胞运动和迁移、参与基因表达调控等多种生物学功能[1]。膜型Ⅰ型金属蛋白酶（memberane type Ⅰmatric metalloproteinase MT1-MMP/MMP-14）是基质金属蛋白酶家族的一个亚族，属于一种跨膜蛋白水解酶，能降解细胞外基质、基底膜、细胞因子、生长因子受体以及生长因子连接蛋白等而在肿瘤细胞的浸润、转移中发挥重要作用[2]。本文通过检测Tiam1与MMP-14在宫颈癌的表达，旨在探讨其表达与宫颈癌之间的关系，并分析其可能的分子机制。
1 对象与方法
1.1 研究对象
收集某医院病理科2010年6月～2012年6月由手术切除并经病理学证实为宫颈鳞癌的石蜡标本100例，全部病例术前均未做放、化疗等治疗，年龄27～68岁，中位年龄45岁。收集宫颈上皮内瘤变（CIN）30例，同时取因妇科良性病变而行子宫全切的正常宫颈10例作为对照。所有标本均经4%甲醛固定后常规石蜡包埋，5 μm切片后HE染色，并由资深病理医师重新进行光镜下确诊。
1.2 主要试剂
兔抗人Tiam1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，鼠抗人MMP-14单克隆抗体、PV-6000试剂盒和二氨基联苯胺（DAB）显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 免疫组化染色及评分
采用二步法进行免疫组化染色，严格按照试剂盒说明书进行操作，DAB显色后行苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照。显色判断：Tiam1和MMP-14于肿瘤细胞胞浆呈棕黄色颗粒着色，在高倍视野下（×400）进行显色评分。首先根据着色细胞百分率计分：细胞质无染色为0分，≤25%为1分，26%~50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分；同时根据染色强度计分：淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分（染色深浅需与背景着色相对比）[3]。每个病例观察10个高倍视野，每项得分各取其平均值，最后总得分为两项相加的和：阴性（－）：＜2分；阳性：2～7分；低表达（+）：2分；中等表达（++）：3~4分；高表达（+++）：5～7分。
1.4 统计学分析
所有数据采用SPSS18.0统计软件进行分析，P ＜ 0.05认为有差异统计学意义。Tiam1和MMP-14的表达以及与宫颈鳞癌临床病理学参数之间的关系采用χ2检验分析，两蛋白的关联密切程度用Spearman秩相关分析。
2 结果
2.1 Tiam1和MMP-14在宫颈各组织类型中的表达
Tiam1在宫颈鳞癌中表达86例（86％），CIN中表达15例（50％），正常宫颈组织中表达2例（20％）。其在宫颈鳞癌的表达与CIN中的表达相比较差异具有统计学意义（P = 0.000）；宫颈鳞癌的表达与正常宫颈组织的比较差异具有统计学意义（P = 0.000）；在CIN中的表达与在正常组织的表达差异无统计学意义（P = 0.097）。
MMP-14在宫颈鳞癌中表达78例（78％），CIN中表达14例（46.7％），正常宫颈组织中表达1例（10％）。其在宫颈鳞癌的表达与CIN中的表达相比较差异具有统计学意义（P = 0.001）；宫颈鳞癌的表达与正常宫颈组织的比较差异具有统计学意义（P = 0.000）；在CIN中的表达与在正常组织的表达差异具有统计学意义（P = 0.038）。见表1。
表1 Tiam1与MMP-14在宫颈各组织类型的表达[n（%）]
2.2 Tiam1在宫颈鳞癌中的表达与临床病理参数的关系
Tiam1的表达与组织分化程度、深肌层浸润以及淋巴结转移比较，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）；与年龄和肿瘤大小无关（P ＞ 0.05）。见表2。
2.3 MMP-14在宫颈鳞癌中的表达与临床病理参数的关系
MMP-14的表达与深肌层浸润和淋巴结转移比较，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）；与年龄、组织分化程度和肿瘤大小无关（P ＞ 0.05）。见表3。
2.4 Tiam1、MMP-14在宫颈鳞癌中的相关性
宫颈癌组织中，Tiam1与MMP-14两者表达强度经Spearman秩相关分析得出，两者在宫颈癌中表达强度呈正相关（r = 0.335，P = 0.000）。
3 讨论 本实验结果显示，Tiam1在宫颈鳞癌中的表达率高于CIN且高于正常宫颈组织，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.01），提示Tiam1可能参与宫颈鳞癌的恶性转化过程。同时观察到，Tiam1的表达与组织分化程度、深肌层浸润以及淋巴结转移有关（P ＜ 0.05），这提示我们，组织分化程度越低，Tiam1的表达率越高；有深肌层浸润组、淋巴结转移组的Tiam1表达率高于无深肌层浸润和无淋巴结转移组的表达率。Tiam1的表达与年龄和肿瘤大小无关（P ＞ 0.05）。该研究结果说明，Tiam1表达阳性的宫颈癌细胞可能具有更强的侵袭转移能力。与之相似，有研究表明，Tiam1在鼻咽癌、胃癌、肝癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中呈阳性表达，且其阳性表达与组织的分化程度、侵袭转移等密切相关[4-7]。
本研究亦观察到，MMP-14在宫颈鳞癌的表达高于CIN和正常组织，且在CIN的表达亦高于正常组织，差异均具有统计学意义（P ＜ 0.05）。MMP-14的表达与深肌层浸润和淋巴结转移有关（P ＜ 0.05）提示，其在有深肌层浸润、淋巴结转移组的表达率高于无深肌层浸润、无淋巴结转移组的表达率。MMP-14的表达与年龄、组织分化程度和肿瘤大小无关（P ＞ 0.05）。有国外学者对MMPs在头颈鳞癌淋巴转移的作用的研究进行Meta分析，结果显示MMP-14可能对头颈鳞癌转移的生物学行为有重要意义[8]。既往研究表明，在对MMP-14在口腔鳞癌的研究中发现：其表达与淋巴结转移有关[9]。本实验研究结果提示，MMP-14可能参与了宫颈鳞癌的恶性转化过程，MMP-14阳性的宫颈癌细胞可能具有更强的侵袭转移潜能。
本研究结果显示，在宫颈癌组织中，Tiam1与MMP-14两者表达强度经Spearman秩相关分析得出，两者在宫颈癌中表达强度呈正相关，说明Tiam1与MMP-14两蛋白可能在宫颈鳞癌的发生发展过程中具有协同作用，但其详细作用的分子机制还需进一步研究。
本研究得出以下结论，Tiam1与MMP-14可能都参与宫颈鳞癌的恶性发展过程，且与宫颈癌的深肌层浸润、淋巴结转移密切相关。两蛋白可能在宫颈鳞癌的发生发展过程中具有协同作用，表达阳性的癌细胞可能具有更强的浸润转移的潜能。因此认为，联合检测Tiam1与MMP-14两蛋白对临床诊断和治疗宫颈鳞癌具有一定的参考价值。
[参考文献]
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（收稿日期：2012-06-08）
