摘要：目的：采用高效液相色谱法测定头孢他啶有关物质。方法：对于本身纯度低于85%的药品，采用高效液相色谱法梯度洗脱法，提出对自身对照溶液主峰进行校正。加强对头孢他啶杂质控制。结论：方法准确，易行，适用于头孢他啶杂质控制。
关键词：头孢他啶 高效液相色谱法 梯度洗脱 杂质控制
1、试剂及对照品
（1）磷酸二氢铵（分析纯）；（2）磷酸 （分析纯）；（3）乙腈（色谱纯）；（4）盐酸（分析纯）；（5）头孢他啶对照品（中国药品生物制品检定所）。
2、主要仪器及用具
（1）安捷伦1200高效液相色谱仪；DAD检测器；（2）分析天平，感量0.00001g；（3）超声波清洗仪；（4）容量瓶；（5）移液管；（6）量筒；（7）烧杯；（8）抽滤装置；（9）水浴锅。
3、色谱条件
色谱柱。用十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂4.6mm×250mm（5um）
检测波长：255nm
流动相A 磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵 22.6g加水溶解并稀释至1000ml，用10%的磷酸溶液调节PH值至3.9）-乙腈（93：7），流动相B乙腈，流速 每分钟1.0ml，柱温 35℃，进样量20ml。
4、溶液配制
（1）10%的磷酸溶液的配制 精密量取磷酸11ml，加水溶解至100ml，摇匀。（2）0.1mol/L盐酸溶液的配制 精密量取盐酸9ml，加水溶解至1000ml，摇匀。（3）供试品溶液的制备 精密称取本品约36mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并定量稀释至刻度，摇匀。（4）对照溶液的制备 精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A定量稀释至刻度，摇匀。
5、系统适用性试验
取头孢他啶对照品约60mg，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液5ml溶解，加水稀释至刻度，摇匀。在沸水浴中放置20分钟，取出，放冷，取20？l注入液相色谱仪，按下表进行线性梯度洗脱，记录色谱图。理论板数按头孢他啶峰计算不低于3000，头孢他啶与其相邻杂质峰间的分离度应不小于1.5。另取对照溶液20？l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的25%（如表1）。
6、空白试验
取流动相A注入液相色谱仪，按上表梯度洗脱，记录色谱图。
7、测定法
精密量取对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图。对照溶液以流动相A100%等 度洗脱，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液按上表进行线性梯度洗脱，记录色谱图。
8、计算
供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积与对照溶液主峰面积的比应符合规定；各杂质峰面积的和与对照溶液主峰面积的比应符合规定。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计，梯度洗脱的空白峰应扣除。
9、头孢他啶与其相邻杂质峰间的分离度应不小于1.5
10、结果与讨论
（1）本方法供试品溶液制备方法简便易行。
（2）杂质数量的统计界限：计算杂质数量时，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰可忽略不计，梯度洗脱的空白峰应扣除。
（3）一般情况下，头孢他啶主峰与相邻杂质峰的分离度为2.0。如果分离度达不到要求可以对流动相A的PH值进行微调，PH4.1-3.7范围内，以达到色谱系统适用性试验的要求。
（4）柱温可以改变杂峰的相对保留时间，在 试验过程中，40℃时主峰的保留时间为13分钟左右，此法受温度影响较大，在检验过程中应注意温度的控制。
（5）分别在70分钟后，140分钟后，210分钟后，280分钟，350分钟后进同一批样品，发现结果最大杂峰，杂峰总和分别为 0.3 0.30，0.3 0.32，0.3 0.39，0.3 0.45 0.3 0.52所以建议供试品应现溶现进，否则杂质容易变大。导致测定结果不准确。
（6）有关物质采用自身对照时，对本身纯度低于85%的药品，提出对自身对照溶液主峰进行校正，以免纯度较低品种采用自身对照法引起的结果偏高而影响准确性。
（7）经测定，本方法结果准确，能有效地控制该物质的杂质。
参考文献
[1] 中国药典2010版.
[2] 欧洲要点.
